基本描述

产品名称

谷胱甘肽亲和层析介质 (GST tag)

别名

UltraBio™ GST 标签纯化树脂 | 谷胱甘肽琼脂糖树脂 | GST标签蛋白纯化填料

英文别名

GSH Resin | Glutathione Agarose beads | GST-tag Purification Resin | GST 4FF

规格或纯度

BioReagent, 50% v/v

产品介绍

本产品是一种GST标签蛋白纯化树脂，结构上以4%交联的琼脂糖凝胶为基质，通过12个原子的间隔臂，用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成。该设计使树脂的纯化效率得到了较大提高，使其每毫升基质可承载>20 mg GST融合蛋白。

此外，本品特异性好，性价比高，可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。

阿拉丁GST 亲和层析介质储存在含20%乙醇的1×PBS中，凝胶和保护液的体积比为1:1，我司产品规格为实际凝胶的体积。

参数	指标
基质	4%交联琼脂糖
配基	通过12原子间隔臂偶联的谷胱甘肽
粒径范围	45~165 μm
结合能力	>20 mg GST蛋白 (40kDa)/mL基质
最大压力	0.1 MPa，1 bar
pH稳定范围	3-12
储存	含20%乙醇的1×PBS，2~8℃
保质期	2年

使用说明

1、缓冲液的准备

缓冲液在使用前最好用0.22μm或者0.45μm滤膜过滤。

平衡/洗杂液：140 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na₂HPO₄, 1.8 mM KH₂PO₄, pH 7.4

洗脱液：用平衡液配制 10mM 还原型谷胱甘肽（现配现用）

注意：平衡液和洗脱液中可加入1–10mM DTT。

2、样品准备

样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

2.1 细菌或酵母表达的蛋白

(1) 挑取单菌落到培养基中，根据载体使用说明，加入相应浓度的诱导剂诱导相应的时间。

(2) 表达结束后，将培养液转移到离心杯中，7,000rpm (7,500×g)，离心15min收集菌体，然后按照菌体：平衡液=1：10（W/V）加入平衡液，加入终浓度为1mM的PMSF。加入溶菌酶（工作浓度为0.2-0.4mg/mL，如果表达的宿主细胞内含pLysS 或pLysE，可以不加溶菌酶），（同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与填料的结合）。

(3) 将菌体沉淀悬浮起来，（如果菌液浓度高，也可考虑加入10μg/mL RNaseA和5μg/mL DNaseI），混匀，放置于冰上，然后冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。

(4) 将澄清的破碎液转移至离心管中，10,000rpm (15,000×g)，4℃离心20-30min。取上清，置于冰上备用或-20℃保存。

2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白

(1) 将细胞培养液转移至离心杯，5,000rpm (3,800×g)，离心10min，收集菌体得上清，即可直接加入柱子使用。

(2) 对于大量体积的上清，需加入硫酸铵沉淀浓缩后，蛋白还需用平衡液透析后才能加入柱子。

3、GST 亲和层析介质重力柱的装填

3.1 取合适规格的重力层析柱，装入下垫片，加入适量纯水润洗柱管和垫片，关闭下出口。

3.2 将GST 亲和层析介质混合均匀，用枪头吸取适量浆液加入至重力柱中（介质实际体积占悬液的一半），打开下出口流干保护液。

3.3 加入适量纯水冲洗介质，待柱管中液体重力流干后，关闭下出口。

3.4 装入润洗后的上垫片，确保垫片与填料之前没有空隙，且保持水平。

3.5 装填好的重力柱可以直接加入平衡液进行平衡，暂不使用时则加入保护液，2-8℃保存。

4、样品纯化

4.1 孵育法纯化

(1) 根据纯化的样品量，取适量GST 亲和层析介质加入离心管中，1000rpm离心1min，吸弃上清；也可加入重力柱中，流干保护液。

(2) 向离心管中加入5倍介质体积的平衡液清洗介质，1000rpm离心1min，吸弃上清；如使用重力柱，则直接在重力柱中清洗，直接重力流干平衡液；重复两次以上。

(3) 加入样品，封闭离心管或重力柱管，4℃振荡孵育2-4h或者37℃孵育30min-2h。

(4) 孵育结束后，1000rpm离心1min，吸弃上清，或过滤收集介质，上清保留作为流穿，用于电泳鉴定。

(5) 用5倍介质体积的洗杂液清洗介质，1000rpm离心1min或重力柱管过滤，去除上清（注意不要吸到介质），重复3-5次，中间建议更换新离心管。

(6) 加入3-5倍柱体积的洗脱液进行洗脱，室温孵育5min，1000rpm离心1min或重力柱管收集洗脱液，可重复2-3次。

4.2 重力柱法纯化

(1) 将装填好的GST 亲和层析介质重力柱用5倍柱体积平衡液进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲液体系下，重复2-3次。

(2) 将样品加到平衡好的重力柱中，样品保留时间至少2min，保证样品和介质充分接触，收集流出液，可以反复上样增加结合效率。

(3) 用10-15倍柱体积的洗杂液进行洗杂，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

(4) 使用5-10倍柱体积的洗脱液洗脱，分段收集，每一个柱体积收集一管，分别检测，既可以保证所有结合的目的蛋白被洗脱，又可以得到高纯度和高浓度的蛋白。

上述步骤洗脱结束后，用平衡液冲洗3倍柱体积，然后用纯水冲洗5倍柱体积，再用保冲洗2个柱体积，然后将介质置于2-8℃保存。

5、SDS-PAGE 检测

将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。

6、填料清洗

GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量性能下降，这时需要对填料进行清洗。

去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法：用2倍柱体积的6M盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH7.4清洗。

去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质：用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH7.4清洗。

注意事项

1、请勿冷冻保存本产品。

2、GST 亲和层析介质使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。

3、本产品仅作科研用途。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

问题及解决方案

This product is a GST-tagged protein purification resin, constructed with a 4% cross-linked agarose gel matrix. Reduced glutathione is covalently conjugated via a 12-atom spacer arm using chemical methods, significantly improving purification efficiency. The resin can bind >20 mg of GST fusion protein per mL of matrix.

Additionally, it offers high specificity and cost-effectiveness, enabling one-step purification of glutathione-S-transferase, glutathione-dependent proteins, and glutathione recombinant derivatives from various expression systems.

Aladdin GST Agarose Resin is stored in 1× PBS containing 20% ethanol, with a settled gel to storage solution ratio of 1:1. The product specification refers to the actual volume of the settled gel.

Parameter	Value / Description
Matrix	4% cross-linked agarose
Ligand	Glutathione conjugated via a 12-atom spacer arm
Particle Size Range	45~165 μm
Binding Capacity	>20 mg GST protein (40 kDa)/mL matrix
Maximum Pressure	0.1 MPa, 1 bar
pH Stability Range	3-12
Storage Conditions	1× PBS with 20% ethanol, 2–8°C
Shelf Life	2 years

Protocol

1. Buffer Preparation
Buffers should be filtered through a 0.22 μm or 0.45 μm membrane before use.

Equilibration/Wash Buffer: 140 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na₂HPO₄, 1.8 mM KH₂PO₄, pH 7.4
Elution Buffer: 10 mM reduced glutathione in equilibration buffer (prepare fresh)
Note: 1–10 mM DTT may be added to both equilibration and elution buffers.

2. Sample Preparation
Clarify samples by centrifugation or filtration (0.22/0.45 μm) before loading to reduce impurities, improve efficiency, and prevent column clogging.

2.1 Proteins Expressed in Bacteria or Yeast
(1) Inoculate a single colony into medium. Induce expression according to vector instructions.
(2) Harvest cells by centrifugation at 7,500 × g for 15 min. Resuspend pellet in equilibration buffer (1:10 w/v). Add PMSF to 1 mM final concentration and lysozyme (0.2–0.4 mg/mL; omit if host contains pLysS/pLysE). Protease inhibitors may be added if they do not affect target binding.
(3) Suspend the pellet thoroughly. Optionally add RNase A (10 μg/mL) and DNase I (5 μg/mL). Mix and place on ice. Sonicate on ice until lysate is clear.
(4) Centrifuge at 15,000 × g, 4°C for 20–30 min. Collect supernatant for immediate use or store at -20°C.

2.2 Soluble Proteins Secreted by Yeast, Insect, or Mammalian Cells
(1) Centrifuge cell culture at 3,800 × g for 10 min. Collect supernatant for direct loading.
(2) For large volumes, concentrate by ammonium sulfate precipitation and dialyze against equilibration buffer before loading.

3. Gravity Column Packing
(1) Select a suitable gravity column. Insert the bottom frit, rinse with purified water, and close the outlet.
(2) Resuspend the GST resin thoroughly. Transfer an appropriate volume of slurry to the column (settled resin volume is half of the slurry). Open the outlet to drain the storage solution.
(3) Rinse with purified water. Close the outlet after draining.
(4) Insert the top frit, ensuring no gaps and a horizontal position.
(5) Equilibrate with equilibration buffer or store with storage solution at 2–8°C.

4. Sample Purification
4.1 Batch Purification
(1) Transfer resin to a centrifuge tube. Centrifuge at 1,000 rpm for 1 min and discard supernatant.
(2) Wash with 5 resin volumes of equilibration buffer. Repeat twice.
(3) Add sample. Incubate at 4°C with shaking for 2–4 h or at 37°C for 30 min–2 h.
(4) Centrifuge at 1,000 rpm for 1 min. Collect supernatant as flow-through for analysis.
(5) Wash with 5 resin volumes of wash buffer. Repeat 3–5 times. Change tubes if needed.
(6) Elute with 3–5 resin volumes of elution buffer. Incubate at RT for 5 min. Collect eluate. Repeat 2–3 times.

4.2 Gravity Column Purification
(1) Equilibrate the column with 5 column volumes (CV) of equilibration buffer. Repeat 2–3 times.
(2) Load sample. Allow at least 2 min residence time. Collect flow-through. Reload to enhance binding.
(3) Wash with 10–15 CV of wash buffer. Collect wash fractions.
(4) Elute with 5–10 CV of elution buffer. Collect fractions (1 CV per tube) for analysis.

After elution, wash with 3 CV equilibration buffer, 5 CV water, and 2 CV storage solution. Store at 2–8°C.

5. SDS-PAGE Analysis
Analyze samples (flow-through, wash, elution, and crude sample) by SDS-PAGE to evaluate purification.

6. Resin Cleaning
Although reusable, resin may require cleaning if performance declines due to non-specific binding or aggregation.

Precipitated/denatured material: Clean with 2 CV of 6 M guanidine HCl, followed by 5 CV PBS, pH 7.4.
Hydrophobic adsorption: Clean with 3–4 CV of 70% ethanol or 2 CV of 1% Triton X-100, followed by 5 CV PBS, pH 7.4.

Precautions

Do not freeze the product.
Resuspend the resin thoroughly by gentle inversion before use.
For research use only.
Wear a lab coat and disposable gloves during operation.

储存与运输

物理形态	液体
储存缓冲液	1×PBS, 20% (v/v) Ethanol
浓度	50% v/v
储存温度	2-8°C储存,禁止冷冻
运输条件	冰袋运输
稳定性与储存	Store at 2-8℃ long term (24 months). Do not freeze.

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):

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货号 (SKU)	包装规格	是否现货
G751554-10ml	10ml	期货
G751554-50ml	50ml	期货
G751554-100ml	100ml	期货

谷胱甘肽亲和层析介质 (GST tag)

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