Ni-NTA 亲和层析介质 (His tag)

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级别和纯度:

BioReagent

用于蛋白分析

30-35 mg His-Tagged protein/mL wet gel; 75 μm

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基本描述

别名

Ni-NTA金属螯合亲和层析介质 | His标签蛋白纯化亲和层析介质 | 组氨酸标签蛋白分离纯化介质 | NI-NTA琼脂糖凝胶填料 | NNTA亲和层析介质

英文别名

Ni-NTA Agarose Resin | Ni-NTA Resin (His-Tag) | Ni-NTA Affinity Resins

规格或纯度

BioReagent, 用于蛋白分析, 30-35 mg His-Tagged protein/mL wet gel; 75 μm

稳定性与储存

Store at 2-8℃ (5 Years). Upon receipt, it is recommended to aliquot.Desiccated.

英文名称

Ni-NTA Affinity Resin (His tag)

储存温度

2-8°C储存

运输条件

冰袋运输

产品介绍

Ni-NTA 是将次氨基三乙酸通过 9 个原子的间隔臂以醚键固定在高交联、高流速的琼脂糖基质上，然后螯合上金属离子 Ni2+而制备成的一种介质。

金属螯合亲和层析介质是一种主要利用蛋白质表面暴露出来的的组基酸（色氨酸、半胱氨酸等亦可辅助结合）能够和金属离子（Cu2+、Zn2+、Ni2+等）进行特异性结合的特性进行蛋白质分离的介质。

本品用于带有 His 标签的蛋白纯化时拥有稳定性高、复杂环境中一步纯化蛋白、目标蛋白质吸附量大、蛋白洗脱条件温和、介质易再生、重复利用率高等优点。

产品特性

表 1 Ni-NTA 的理化性质及特征参数

参数	指标
基质	6%高交联琼脂糖
配基	-CH(COOH)N(CH2COOH)2
平均粒径	90 μm(45-165μm)
Ni2+离子容量	15-25 μmol Ni2+/mL
动态载量	30-35 mg His-Tagged protien/mL wet gel(40KD)
推荐流速	150-300 cm/h
最高流速	600 cm/h
最高耐压	0.3 MPa (3 bar)
避免使用	螯合剂（EDTA、柠檬酸等）、强还原剂（DTT 等）
pH(工作范围)	3-12
pH(在位清洗)	2-14
保存	4-30℃（20%乙醇）

使用方法

本品可广泛应用于 his 标签蛋白等生物分子的分离纯化，但因对不同标签蛋白的结合能力不同，不同蛋白活性保存条件不同等原因，建议用户进行方法筛选。以下提供一种参考工艺：

平衡：使用 10CV 的 buffer A（20 mM PB+0.5 M NaCl, pH 7.4 或其它中性/弱碱性高盐缓冲液）进行柱子平衡（平衡至基线）。

上样：上样适量样品（固体样品请使用 buffer A 配制，液体样品可使用 buffer A 进行透析）；为了减少杂蛋白在层析柱上的吸附，可在确保目标蛋白吸附的情况下适当增加样品缓冲液中的咪唑（具体浓度根据优化结果确定，并与平衡缓冲液的咪唑浓度保持一致）。

洗涤：使用 5CV 的 buffer A 洗涤柱子（淋洗至基线）。

洗脱：使用 buffer B（20 mM PB + 0.5 M NaCl + 0.5 M 咪唑，pH 7.4；洗脱缓冲液中一般含有竞争试剂咪唑，并加入 0.1-1.0 M 的 NaCl 以抑制离子交换作用）进行洗脱。可以采用线性洗脱和阶梯式梯度洗脱两种方式进行。

（备注：洗脱一般有两种方式：一是采用竞争试剂，如咪唑（0-0.5 M）、组氨酸（0-0.05M）、氯化铵（0-2 M）等将蛋白质从柱子上置换下来；二是减小 pH 值，洗脱目标蛋白，大多数蛋白质在 pH 4~6 的范围内可被洗下来。用竞争试剂咪唑或减小 pH 值的方法洗脱蛋白质，金属离子仍结合在柱子上；若用竞争试剂组氨酸或氯化铵洗脱蛋白质，会将金属离子和蛋白质的复合物一起洗下来）。

中和：收集洗脱产物，使用碱性缓冲液（20 mM PB + 0.5 M NaCl + 0.5 M 咪唑，pH 7.4；）将抗体稀释至稳定 pH 值。

再生：在进行一定次数的使用后（具体使用次数和上样中的污染物有关），需要对柱子进行再生，以下提供一种方法：

首先用 2-3 CV 的纯水清洗层析柱，然后用 5 CV 的 20 mM PB + 0.5 M NaCl +50 mM EDTA，pH 7.4 淋洗柱子，再分别用 5 CV 的 20 mM PB + 0.5 M NaCl，pH 7.4 溶液和 5 CV 的纯水清洗柱子，去除柱上残留的 EDTA。

选择合适的金属离子（Ni2+或 Cu2+、Zn2+、Co2+、Fe3+等）溶解于中性或弱酸性溶液中，浓度为 0.2 mol/ml（如选择 Fe3+则必须在低 pH 3.0 下螯合，以防止 Fe3+产生沉淀），过滤后使用。

将介质与金属离子溶液混合置于摇床上震荡过夜，在进行装柱。

在位清洗：为了避免不同样品间的相互干扰，或者当介质污染比较严重时（反压增加），需要对介质进行在位清洗。在位清洗前，需要预先剥离介质上鳌合的金属离子。在位清洗时，可采用反向冲洗的方法。

（1）对于以离子键结合的蛋白，可用 2-3 CV 以上的 2 M NaCl 清洗，并用 3 CV 以上的纯水冲洗。

（2）对沉淀蛋白、以疏水性结合的蛋白或脂蛋白，可用 2-3 CV 的 1M NaOH 清洗（10-20min），并用 5-10 CV 平衡液和 3 CV 以上的纯水冲洗。

（3）对疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用 5-10 CV 的 70%乙醇或 30%异丙醇清洗（15-20 min），并用 5-10 CV 的纯水冲洗。

此外，也可用 2 CV 含去污剂的碱性或酸性溶液清洗。如用 0.1-0.5%的非离子去污剂+0.1M 乙酸冲洗 1-2 h，并用 5-10 CV 的 70%乙醇冲洗去除去污剂，然后用 5-10 CV 的纯水冲洗。

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

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批号(Lot Number)	证书类型	货号
ZJ25F0723999	分析证书	N928428
ZJ25F0723998	分析证书	N928428

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