基本描述

别名

Ni-TED金属螯合亲和层析介质 | His标签蛋白纯化亲和层析介质 | 组氨酸标签蛋白分离纯化介质 | NI-TED琼脂糖凝胶填料 | Ni-TED 亲和层析介质

英文别名

Ni-TED Agarose Resin | Ni-TED Resin (His-Tag) | Ni-TED Affinity Resins

规格或纯度

BioReagent, 用于蛋白分析, 10 mg His-Tagged protein/mL wet gel; 75 μm

稳定性与储存

Store at 2-8℃ (5 Years). Upon receipt, it is recommended to aliquot.Desiccated.

英文名称

Ni-TED Affinity Resin (His tag)

储存温度

2-8°C储存

运输条件

冰袋运输

产品介绍

本产品由 TED 配基（-N(CH2COOH)CH2CH2N(CH2COOH)2）和高刚性琼脂糖组成。

金属螯合亲和层析介质是一种主要利用蛋白质表面暴露出来的的组氨酸（色氨酸、半胱氨酸等亦可辅助结合）能够和金属离子（Cu2+、Zn2+、Ni2+等）进行特异性结合的特性进行蛋白质分离的介质。 Ni-TED 金属螯合亲和层析介质是将三（羧甲基）乙二胺（TED）固定在高度交联的琼脂糖基质上，然后螯合上金属离子 Ni2+而制备成的一种介质。 Ni-NTA与 Ni2+具有 4 个螯合位点，而 Ni-TED 与 Ni2+具有 5 个螯合位点，使得其对于 Ni2+具有很强的约束力，这一特性赋予了本品具有优异的 DTT 以及 EDTA 耐受性。本品用于带有 His标签的蛋白纯化时拥有稳定性高、复杂环境中一步纯化蛋白、蛋白洗脱条件温和、介质易再生、重复利用率高等优点。

产品特性

表 1 Ni-TED 的技术参数

参数	指标
基质	高刚性琼脂糖
配基	-N(CH2COOH)CH2CH2N(CH2COOH)2
平均粒径	75 μm（40-120 μm）
Ni2+离子容量	＞60 μmol Ni2+/mL
动态载量	10 mg His-Tagged protein/mL wet gel（40 KD）
推荐流速	150-300 cm/h
最高流速	1200 cm/h
最高耐压	0.3 MPa （3 bar）
化学稳定性	10 mM EDTA，5 mM DTT， 5 mM TCEP，20 mM β-巯基乙醇, 1 M NaOH，6 M 盐酸胍
工作范围（pH）	3-12
在位清洗（pH）	2-14
储存条件	4-30 ℃（20%乙醇）

使用方法

本品可广泛应用于 his 标签蛋白等生物分子的分离纯化，但因对不同标签蛋白的结合能力不同，不同蛋白活性保存条件不同等原因，建议用户从缓冲液选择、样品体积、上样流速、洗脱强度等方面进行工艺优化。

推荐缓冲液：

平衡缓冲液：20 mM PB+0.5 M NaCl，pH 7.4

清洗缓冲液：20 mM PB+0.5 M NaCl，0-30 mM 咪唑，pH 7.4

洗脱缓冲液：20 mM PB+0.5 M NaCl，500 mM 咪唑，pH 7.4

缓冲液优化：

Ni-TED 与蛋白间会存在一定的离子交换作用，在缓冲液中加入 0.5 -1.0 M NaCl可以抑制。

在清洗缓冲液可以加入适量的咪唑以洗去部分来源于宿主细胞的非目标蛋白，但对于有些与配基结合力较弱的目标蛋白，低浓度咪唑也有可能将其洗脱下来一小部分，因此我们必须在收率和纯度之间寻找出一个平衡点。Ni-TED 相对于Ni-IDA/ Ni-NTA 只需要更低浓度的咪唑即可洗脱目标蛋白，我们建议以 10-20 mM 咪唑作为起始点进行反复尝试以寻找最佳的咪唑浓度。

洗脱缓冲液一般会加入 0-0.5 M 咪唑作为竞争试剂，也可以选择减小 pH 值来洗脱目标蛋白，大多数蛋白质在 pH 2.5~5 的范围内可被洗下来。如果目标蛋白对 pH 值比较敏感，可以及时使用 1 M Tris-HCl, pH 9.0 对洗脱液进行平衡。BiogCap ® Ni-TED 与 Ni-IDA/ Ni-NTA 有一个不同点是：使用低 pH 值的方式进行洗脱后，也不必进行 Ni2+的补充。

清洗：当介质储存于 20%乙醇中时，使用 5 CV 去离子水在 50-100 cm/h 流速下进行洗涤。

平衡：使用 10 CV 的平衡缓冲液在 150-600 cm/h 流速下进行柱子平衡（平衡至基线）。

上样：在 150-600 cm/h 流速下上样适量样品（固体样品请使用平衡缓冲液配制，液体样品可使用平衡缓冲液进行透析）；

（在低流速下可以获得更高的载量）

洗涤：使用 20 CV 的清洗缓冲液在 100-200 cm/h 流速下洗涤柱子。

洗脱：使用 5 CV 洗脱缓冲液在 100-200 cm/h 条件下进行一步洗脱或者使用 10-20 CV 洗脱缓冲液在 100-200 cm/h 条件下进行线性洗脱。

（线性洗脱可以获得更高纯度的目标蛋白，但随之蛋白浓度会有一定程度上的降低）。

中和：若是采用降低 pH 值对的方法进行洗脱，请及时使用 1 M Tris-HCl，pH 9.0 对目标蛋白进行平衡。

再生：在进行一定次数的使用后（具体使用次数和上样中的污染物有关），需要对柱子进行再生，以下提供一种方法：

首先用 2-3 CV 的纯水清洗层析柱，然后用 5 CV 的 20 mM PB + 0.5 M NaCl +200 mM EDTA，pH 7.4 淋洗柱子，再分别用 5 CV 的 20 mM PB + 0.5 M NaCl，pH 7.4 溶液和 5 CV 的纯水清洗柱子，去除柱上残留的 EDTA。

选择合适的金属离子（Ni2+或 Cu2+、Zn2+、Co2+、Fe3+等）溶解于中性或弱酸性溶液中，浓度为 0.2 mol/mL（如选择 Fe3+则必须在低 pH 3.0 下螯合，以防止 Fe3+产生沉淀），过滤后使用。

将介质与金属离子溶液混合置于摇床上震荡过夜，在进行装柱。

在位清洗：为了避免不同样品间的相互干扰，或者当介质污染比较严重时（反压增加），需要对介质进行在位清洗。在位清洗前，需要预先剥离介质上螯合的金属离子。

在位清洗时，可采用反向冲洗的方法。

（1）对于以离子键结合的蛋白，可用 2-3 CV 以上的 2 M NaCl 清洗，并用 3 CV 以上的纯水冲洗。

（2）对沉淀蛋白、以疏水性结合的蛋白或脂蛋白，可用 2-3 CV 的 1 M NaOH 清洗（10- 20 min），并用 5-10 CV 平衡液和 3 CV 以上的纯水冲洗。

（3）对疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用 5-10 CV 的 70%乙醇或 30%异丙醇清洗（15-20 min），并用 5-10 CV 的纯水冲洗。此外，也可用 2 CV 含去污剂的碱性或酸性溶液清洗。如用 0.1-0.5%的非离子去污剂+0.1 M 乙酸冲洗 1-2 h，并用 5-10 CV 的 70%乙醇冲洗去除去污剂，然后用 5-10 CV 的纯水冲洗。

如以上方法均不能使反压降低，请更换介质，并在上样前对缓冲液、样品进行澄清处理（推荐使用 0.45 μm 滤膜进行过滤）。

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):

输入批号以搜索分析图谱:

通过匹配包装上的批号来查找并下载产品的 COA，每批产品都进行了严格的验证，您可放心使用！

找到2个结果

批号(Lot Number)	证书类型	货号
ZJ25F0723995	分析证书	N901622
ZJ25F0723994	分析证书	N901622

技术文档和文章

n901622_ni ted affinity resin his tag 产品说明书.pdf

溶液计算器

摩尔浓度计算器

计算溶液所需的质量、体积或浓度。

质量

=

浓度

x

体积

x

分子量

g/mol

稀释计算器

计算配制储备溶液所需的稀释度。

浓度1（C1）

x

体积 1 (V1)

=

浓度 2 (C2)

x

体积 2 (V2)

复溶计算器

复溶计算器允许您快速计算试剂的体积，以复溶小瓶。只需输入试剂的质量和目标浓度，计算器将确定其余部分。

体积（添加到小瓶中）

=

质量（小瓶）

÷

所需的复溶浓度

货号 (SKU)	包装规格	是否现货
N901622-10ml	10ml	期货
N901622-50ml	50ml	期货
N901622-100ml	100ml	期货

Ni-TED 亲和层析介质 (His tag)

库存信息

库存信息

库存信息

基本描述

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

技术文档和文章

溶液计算器

摩尔浓度计算器

稀释计算器

复溶计算器