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Bst DNA Polymerase, Large Fragment (powder)

  • 表达系统: E. coli
  • Accession #: Q45458
  • 生物活性: One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 65℃
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B744267-4KU
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基本描述

产品名称 Bst DNA Polymerase, Large Fragment (powder)
别名 Bst DNA 聚合酶,大片段(粉末) | Bst DNA 聚合酶 | 大片段 | 嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶I大片段
英文别名 (Bacillus stearothermophilus, Bst) DNA Polymerase I , Large Fragment | DNA polymerase I | polA
规格或纯度 ActiBioPure™, 生物活性, EnzymoPure™, 无动物源, 无载体, 无菌, 无DNA酶和RNA酶, 长期储存-20℃(24个月);避免反复冻融。
产品介绍

本公司生产的 Bst DNA Polymerase, Large Fragment (powder)即嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus, Bst) DNA Polymerase I 大片段,具有 5'→3' DNA 聚合酶活性,不具有 3'→5'和 5'→3'的核酸外切酶活性。Bst DNA Polymerase, Large Fragment 具有很强的链置换(stranddisplacement)能力,可应用于核酸的等温扩增反应,如环介导的等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)和滚环扩增(Rolling-circle amplification, RCA)等。Bst DNA Polymerase, Large Fragment 介导的等温扩增温度一般在 50-68℃之间,通常为 65℃。与Bst DNA Polymerase 2.0 相比,本产品在进行等温扩增时不具有将 dUTP 掺入合成的 DNA 链的能力。Bst DNA Polymerase 具有 5'→3'的核酸外
切酶活性,而 Bst DNA Polymerase, Large Fragment 通过删除突变而缺失了 5'→3'核酸外切酶活性。
组分和说明

B744267Component4KUStorage
B744267ABst DNA Polymerase, Large Fragment (powder)4KU-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
B744267B10X Bst Reaction Buffer1.5ml-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
B744267C100mM MgSO41ml-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.

产品应用
环介导等温扩增 LAMP、解旋酶等温基因扩增(HDA)等 DNA 等温扩增,多重置换扩增(MDA),全基因组扩增(WGA),高 GC 含量 DNA 的测序,纳克级 DNA 模板的快速测序,建库测序等。
产品优势
酶活性好,在进行等温扩增时不具有将 dUTP 掺入合成的 DNA 链的能力。强大的链置换能力、高灵敏度和高特异性、高保真性和热稳定性。
使用说明
1.以 LAMP 等温扩增为例,参考下表设置反应体系。

Reagent Volume Final concentration
Nuclease-Free Water(13.5-x)μl  -
10X Bst Reaction Buffer 2.5μl 1X
MgSO4 (100mM) 1.5μl 6mM (8mM total)
dNTP (10mM each)3.5μl 1.4mM each
FIP/BIP Primers (25X, 40μM) 1μl1.6μM
F3/B3 Primers (25X, 5μM) 1μl 0.2μM
LoopF/B Primers (25X, 10μM) 1μl 0.4μM
Template xμl >10 copies or more
Bst DNA Polymerase, Large Fragment (8U/μl) 1μl 320U/ml
Total volume 25μl -

注 1:在配制反应体系完成后,可每 25μl 体系的反应管管盖加适量高浓度的 SYBR Green I 1μl,待等温扩增反应结束后,8000g 离心 1min,
反应体系变荧光绿为阳性,保持无色或棕色为阴性。也可以无需添加指示剂,待反应程序结束后,可见反应液明显变浑浊为阳性,反应
液保持透明为阴性。
注 2:如需优化反应,可调整 Mg2+浓度(4-10mM),酶量(0.04-0.32U/μl)或改变反应温度(50-68℃)。
注 3:如果通过琼脂糖凝胶电泳或其它需要打开 LAMP 反应容器的方法进行分析,请设置辅助分析区域和设备,以避免污染。
注 4:由于反应比较迅速,为了确保实验的重现性,建议模板 DNA 最后加入。
注 5:强烈建议设置未加模板的阴性对照,以确保扩增的特异性。
注 6:为了防止在配置试剂时发生污染,请务必在超净工作台内进行操作。
注 7:试剂及模板 DNA 的配置操作尽量需要和 PCR 产物的电泳等分析在不同的区域进行,以免发生污染。
3.反应程序:65℃ 60min。
4.灭活:80℃ 20min。
5.如实验需要,可以用 1.5%的琼脂糖凝胶进行电泳分析,电泳图显示扩增产物为梯度条带为阳性,无梯度条带为阴性。
注意事项:
(1)本产品为冻干粉,使用前需要先溶解,请使用推荐的溶解储存液进行溶解,溶解后的酶需要分装后保存于-20℃,避免反复冻融。
(2)Bst DNA Polymerase, Large Fragment 不具有 3'→5'核酸外切酶活性。
(3)建议等温扩增反应温度不能高于 70ºC,否则会导致酶失活。
(4)Bst DNA Polymerase,Large Fragment 不能用于热循环测序和 PCR。
(5)每次等温扩增实验注意设置无模板 DNA 作为阴性对照。
(6)本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
(7)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


生物活性 One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 65℃
表达系统 E. coli
种属 嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)
无载体 Yes
无动物源 Yes
Accession # Q45458

储存与运输

物理形态 冻干(Lyophilized)
储存缓冲液 10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) glycerol, pH7.5
浓度 长期储存-20℃(24个月);避免反复冻融。
储存温度 -20°C储存,避免反复冻融
运输条件 超低温冰袋运输
稳定性与储存 -20ºC保存,至少一年有效。
单位定义 One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 10nmol of dNTP into acid insoluble material in 30 minutes at 65ºC。
分子类型

质检证书(CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
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批号(Lot Number) 证书类型 货号
ZJ25F0723802 分析证书 B744267

技术文档和文章

溶液计算器