This is a demo store. No orders will be fulfilled.

首页   400-620-6333
  • 登录
  • 注册
  • 英文站
切换导航
我的购物车
搜索
高级搜索
菜单
登录
设置
྾

E. coli DNA Ligase

COA COA
    级别和纯度:
  • 不含除E. coli DNA Ligase之外的其它种类的DNA连接酶，不含内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
有货

库存信息

关闭

库存信息

关闭

库存信息

关闭
货号 (SKU) 包装规格 是否现货 价格 数量
E745500-200U
 200U 期货 Stock Image
E745500-1KU
 1KU 期货 Stock Image
E745500-5KU
 5KU 期货 Stock Image
大包装询价 收藏夹 比较  SDS下载  DATASHEET  质量标准
查看相关系列
DNA连接 (4)
main product photo

基本描述

别名 大肠杆菌 DNA 连接酶
规格或纯度 不含除E. coli DNA Ligase之外的其它种类的DNA连接酶，不含内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
稳定性与储存 -20℃保存，两年有效。
英文名称 E. coli DNA Ligase
储存温度 -20°C储存
运输条件 超低温冰袋运输
产品介绍

阿拉丁生产的E. coli DNA Ligase，即大肠杆菌DNA连接酶，由阿拉丁自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组酶。E. coli DNA Ligase是一种以NAD+ (烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)为辅酶，Mg2+', "依赖的，催化双链DNA中5'磷酸和3'羟基之间形成磷酸二酯键，即催化双链DNA粘性末端连接或双链DNA中的缺刻修复的DNA连接酶1]。E. coli'DNA Ligase可催化双链DNA相邻粘性末端5'磷酸和3'羟基磷酸二酯键的形成，但常规条件下不能进行平末端双链DNA的连接。在添加10-15% PEG和适当高浓度的单价阳离子时，也可以催化平末端双链DNA的连接反应。"E. coli DNA Ligase在一定温度范围内(4-37℃)均具有活性，同时可以被热失活(65℃孵育20分钟)。阿拉丁生产的E. coli DNA Ligase连接粘性末端双链线性DNA的效果请参考图1：图1. 阿拉丁生产的E. coli DNA Ligase连接粘性末端双链线性DNA的效果图。利用阿拉丁生产的EnzymoPure™ DNA Polymerase ，使用两端带有Hind III酶切位点的引物对靶基因进行PCR扩增，生成两种不同长度的两端带有HindⅢ酶切位点的平末端双链线性DNA分子(900bp和600bp)，随后使用阿拉丁Hind III 对PCR产物进行酶切，获得两端带有互补粘性末端的双链线性DNA分子，分别作为Substrate 1 (900bp)和Substrate 2 (600bp)；在20µl反应体系(30mM Tris-HCl, 4mM MgCl2, 1mM DTT, 26μM NAD, 50μg/ml BSA, PH8.0 @25℃)中，分别加入400ng经PCR扩增及Hind III酶切产生的两种双链DNA片段，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的E. coli DNA Ligase，16℃孵育30分钟进行连接，然后65℃孵育20分钟以终止反应。取出10μl反应产物，加入2μl 6X DNA Loading Buffer ，然后进行2%琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有相当的连接粘性末端双链线性DNA的效果。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。


用途：

粘性末端双链DNA分子的连接；双链DNA的缺刻修复；cDNA第二链合成后的克隆[2]。


来源：

纯化自携带编码E. coli DNA ligase的E. coli重组菌株。


酶储存溶液：

10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol (pH7.4 @25℃)。10X Reaction Buffer: 300mM Tris-HCl, 40mM MgCl2, 260μM NAD, 10mM DTT, 500μg/ml BSA (pH8.0 @25℃)。


失活或抑制：

65℃孵育20分钟可使E. coli DNA Ligase失活。


注意事项：

10X Reaction Buffer建议长期保存于-80℃，以延长NAD半衰期。E. coli DNA Ligase需要以NAD (烟酰胺腺嘌呤二核苷酸) 作为辅酶，而不是像T4 DNA连接酶等以ATP为辅酶。E. coli DNA Ligase对于平末端片段的连接效率是极低的，对于平末端的连接建议使用T4 DNA Ligase。E. coli DNA Ligase的催化底物是双链DNA分子，不能用于单链DNA或RNA的连接反应。E. coli DNA Ligase连接反应需要以NAD作为辅助因子，10X Reaction Buffer中含有辅助因子NAD，因此10X Reaction Buffer建议长期保存于-80℃，以延长NAD半衰期。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用说明：

1.参考下表在冰浴中配制反应体系(以20μl体系为例)： ReagentVolumeFinal ConcentrationdsDNAxμlup to 0.25μg/μl10X Reaction Buffer2μl1XE. coli DNA Ligase (10U/μl)1μl0.5U/μlNuclease-free Water(17-x)μl-Total Volume20μl-注1：如果同时进行多个反应，可把上表中除底物DNA之外的所有组分预先混合，然后再分装到各反应管。注2：E. coli DNA Ligase使用时宜存放在冰盒内或冰浴上。2.轻轻震荡混匀或移液器反复吹打混匀，随后低速离心以使粘附在管壁上的液体沉淀至管底。3.反应条件：16℃孵育30-60分钟。4.终止反应：反应结束后立即将反应产物在65℃条件下孵育20分钟，以终止反应。5.将反应后的产物进行琼脂糖凝胶或聚丙烯凝胶电泳，拍照观察并分析连接效果。如果需要从琼脂糖凝胶中回收DNA样品，推荐使用D0056 DNA凝胶回收试剂盒；如果需要从酶切消化反应体系中纯化DNA样品，推荐使用D0033 PCR纯化试剂盒/DNA纯化试剂盒。6.其他用途请自行参考E. coli DNA Ligase的相关文献资料进行。 常见问题：1.E. coli DNA Ligase和T4 DNA Ligase有什么区别？在推荐的使用条件下，E. coli DNA Ligase不能连接平末端DNA或RNA分子[3]。2.E. coli DNA Ligase能否被热失活?可以。将E. coli DNA Ligase在65℃条件下孵育20分钟，即可使其完全失活。3.应该选用哪种连接酶或连接试剂盒?如果需要平末端或粘性末端的快速连接，建议使用快速DNA连接试剂盒。T4 DNA Ligase 是大多数DNA重组反应所选用的酶，可用于粘性末端(室温10分钟连接)或平末端(室温2小时或过夜)的连接。E. coli DNA Ligase对底物的选择比T4 DNA Ligase更具有特异性，如果只需要粘性末端的连接，抑制平末端或RNA分子的连接，建议使用E. coli DNA Ligase。如果实验目的是单链DNA或RNA分子的连接，建议使用T4 RNA Ligase 。参考文献：1.Lehman IR. Science. 1974. 186(4166):790-7.2.Okayama H and Berg P. Mol Cell Biol. 1982. 2(2):161-70.3.Higgins NP and Cozzarelli NR. Methods Enzymol. 1979. 68:50-71.

One unit is defined as the amount of enzyme required to ligate 50% of HindIII fragments of λ DNA (5' DNA termini concentration of 0.12μM, 300μg/ml) in a total reaction volume of 20μl in 30 minutes at 16℃.


Application：

Ligation of dsDNA with sticky ends; nick repair of dsDNA; cloning after the synthesis of second strand cDNA [2] .


Source：

Recombinant E. coli DNA ligase expressed in E. coli.


Enzyme storage buffer：

10mM Tris-HCl, 50mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol (pH7.4, 25℃).


Inactivation or inhibition：

E. coli DNA Ligase can be inactivated by incubation at 65℃ for 20 minutes.


Precautions：

The ligation efficiency of this product for blunt-end fragments is extremely low. Use T4 DNA Ligase for blunt-end ligation.This product cannot be used for the ligation of ssDNA or RNA.This kit is for R&D only. Not for drug, household, or other uses.For your safety and health, please wear a lab coat and disposable gloves during the operation.


Instructions for Use：

1. Set up the reaction on ice as follows:ReagentVolumeFinal ConcentrationdsDNAxμlup to 0.25μg/μl10X Reaction Buffer2μl1XE. coli DNA Ligase (10U/μl)1μl0.5U/μlNuclease-free Water(17-x)μl-Total Volume20μl-Note 1: When multiple reactions are required, prepare a master mix including all reagents except the substrate DNA and then dispense to different nuclease-free PCR tubes. Finally, add substrate DNA to each tube.Note 2: E. coli DNA Ligase should be kept on ice during the experiment.2. Mix well by pipetting or vortex gently. Centrifuge briefly to collect liquid at the bottom of the PCR tube.3. Incubate at 16℃ for 30-60 minutes.4. After incubation, immediately heat inactivate the reaction at 65℃ for 20 minutes.5. Examine the reaction products by agarose gel or polypropylene gel electrophoresis. If DNA need to be recovered from agarose gel, we recommend using the DNA Gel Extraction Kit . To purify DNA from the enzyme digestion reactions, we recommend using the PCR Clean Up Kit/DNA Purification Kit .6. For other applications, please refer to the relevant literature for E. coli DNA Ligase.FAQ:1. What is the difference between E. coli DNA Ligase and T4 DNA Ligase?Under the recommended conditions in the manual, E. coli DNA Ligase cannot ligate blunt-end DNA or RNA molecules [3].2. Can E. coli DNA Ligase be heat-inactivated?E. coli DNA Ligase can be inactivated by incubation at 65℃ for 20 minutes.3. How to choose the appropriate ligase or ligation kit?For rapid ligation of blunt- or sticky-end DNA fragments, the Rapid DNA Ligation Kit is recommended. T4 DNA Ligase is suitable for most DNA recombination reactions and can be used for sticky-end (10-minute ligation at room temperature) or blunt-end (2-hour or overnight ligation at room temperature) ligations. However, E. coli DNA Ligase is more selective for substrates and is recommended for sticky-end ligations. For ligation of ssDNA or RNA molecules, we recommend using the T4 RNA Ligase .References:1. Lehman IR. Science. 1974. 186(4166):790-7.2. Okayama H and Berg P. Mol Cell Biol. 1982. 2(2):161-70.3. Higgins NP and Cozzarelli NR. Methods Enzymol. 1979. 68:50-71.

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):
输入批号以搜索分析图谱:

溶液计算器

上海阿拉丁生化科技股份有限公司
© 2016 ALADDIN-E.COM . 版权所有,未经授权禁止拷贝本站资料,如有违反,将追究法律责任

本网站销售的所有产品仅用于工业应用或者科学研究等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或者治疗,非药用,非食用。

上海工商 危险品化学品经营许可证（带存储）营业执照(三证合一)