| 货号 (SKU) | 包装规格 | 是否现货 | 价格 | 数量 |
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| P745696-800pmol |
800pmol |
期货  |
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| P745696-5×800pmol |
5×800pmol |
期货 |
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| 产品名称 | pA-Tn5 转座酶 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 别名 | EnzymoPure™ pA-Tn5 转座酶 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 规格或纯度 | EnzymoPure™, 无动物源, 无载体, 无菌, ≥95%(SDS-PAGE), 40μM | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 产品介绍 |
本公司生产的 pA-Tn5 Transposase ，中文名为 pA-Tn5 转座酶，是一种来源于 E.coli，经过改造的具有极高活性 Tn5 转座酶突变体和 Protein A 的融合蛋白。pA-Tn5 转座酶在和适当测序接头(Adapters)组装后成为 pA-Tn5 Transposome (pA-Tn5 转座体)，可用于 CUT&Tag 实验。CUT&Tag (Cleavage Under Targets and Tagmentation)，即靶向剪切及标记，是一种新兴的蛋白质与 DNA 相互作用的研究方法，具有特异性强、背景噪音较低、灵敏度高、重复性较好、成本低等优点，被用来替代传统的 ChIP-Seq (Chromatin Immunoprecipitation-sequencing)方法。CUT&Tag 技术的核心是利用 pA/G-Tn5 Transposome 上的 Protein A 或 Protein G 具有与靶蛋白上结合的抗体特异性结合的能力，使 Tn5 转座体能通过 Protein A/G 及抗体与靶蛋白形成复合物，随后加入 Mg2+激活 Tn5 转座体的酶活性对靶蛋白结合的 DNA 进行切割实现靶向的 DNA 片段化(DNA Fragmentation)，同时将其携带的测序接头连接到片段两端从而实现标记，后续通过 PCR 反应进行缺口填补，并借助双端标记 PCR 引物 (Dual-indexed PCR primers)扩增后，制备成适用于二代测序(Next generation sequencing, NGS)平台的 DNA 文库 。 活性定义：超活性突变，高效快速反应 组分和说明
产品应用 pA-Tn5 转座酶在和适当测序接头(Adapters)组装后成为 pA-Tn5 Transposome (pA-Tn5 转座体)，可用于 CUT&Tag 实验。 产品优势 与野生型 Tn5 转座酶相比，插入效率至少提升 1000 倍，具有转座随机性好、稳定性高、插入位点易测序等特点。 使用说明 构建 CUT&Tag 实验所需的 pA-Tn5 转座体。 1.ME 和接头(Adapters)的序列。 ME: 5'-[phos]CTGTCTCTTATACACATCT-3' Primer 1: 5'-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3' Primer 2: 5'-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3' 注：本接头序列参考 DNA Sample Preparation Kit，也可按照不同高通量测序的要求进行设计。 2.制备 Adapter 1 和 Adapter 2。 按照下表分别配制 Adapter 1 和 Adapter 2 退火反应体系。退火反应后 Adapter 1 或 Adapter 2 的终浓度为 200μM。
使用 PCR 仪按下表设置退火反应程序，反应结束即可获得 Adapter 1 和 Adapter 2。
3.pA-Tn5 转座体的制备。 按照下表，将 pA-Tn5 Transposase、Adapter 1 和 Adapter 2 按摩尔比 1:0.5:0.5 混合，吹打混匀，室温孵育 1 小时。
注意事项： （1）本产品含 50%甘油，-20℃保存不会冻结。须避免-80℃保存，否则会冻结， 反复冻融可能会降低本产品的酶活性。 （2）本产品较为粘稠，吸取时注意取样量准确，加样后请注意充分吹打混匀，避免产生气泡。 （3）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 （4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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| 表达系统 | E. coli | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 种属 | 大肠杆菌(E.coli) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 无载体 | Yes | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 无动物源 | Yes | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Accession # | Q46731 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 来源 | 重组表达 |
| 物理形态 | 液体 |
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| 储存缓冲液 | 50mM HEPES, 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol, pH7.2 |
| 浓度 | 40μM |
| 储存温度 | -20°C储存,避免反复冻融 |
| 运输条件 | 超低温冰袋运输 |
| 稳定性与储存 | 长期储存-20℃（24个月）；避免反复冻融。 |
| 分子类型 | 酶 |
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