核糖核酸酶III (dsRNA-specific)

COA

级别和纯度:

2.0 U/µL

表达系统: E. coli
Accession #: B1XB41.1
生物活性: One unit is the amount of enzyme required to digest 1µg of dsRNA to siRNA in 20 minutes at 37ºC in a total reaction volume of 50µl.

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Accession#: B1XB41 (1) Gene ID: 93774524 (1) RNase III (1)

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基本描述

产品名称	核糖核酸酶III (dsRNA-specific)
别名	RNase III（dsRNA 特异性） \| 核糖核酸酶 III
英文别名	Ribonuclease III (dsRNA specific)
规格或纯度	ActiBioPure™, EnzymoPure™, 生物活性, 无动物源, 无载体, 无菌, 无DNA酶, 2.0 U/µL
生化机理	Digests double-stranded RNA. Involved in the processing of primary rRNA transcript to yield the immediate precursors to the large and small rRNAs (23S and 16S). Processes some mRNAs, and tRNAs when they are encoded in the rRNA operon. Processes pre-crRNA and tracrRNA of type II CRISPR loci if present in the organism.
产品介绍	阿拉丁生产的RNase III，即核糖核酸酶III，是由阿拉丁自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种来源于大肠杆菌的双链RNA (Double-strand RNA, dsRNA)特异性的核糖核酸酶。在锰离子(Mn2+', ")存在的反应缓冲液中，RNase III可特异性地将较长的双链RNA (dsRNA)切割成长度约为18-25bp的3'羟基末端带有2-3个突出碱基的干扰RNA (siRNA) 1,2]，该产物与Dicer酶切产生的底物类似，具有用于哺乳动物细胞的RNA干扰(RNA interference)、基因沉默、靶标确认等多种用途3]。RNase III不能水解DNA或单链RNA。阿拉丁生产的RNase III用于切割500bp双链RNA生成siRNA的效果请参考图1。图1. 阿拉丁生产的RNase III 切割500bp双链RNA生成siRNA的效果图。使用本产品或N公司(Competitor)的RNase III，在10µl反应体系(50mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM DTT, 20µM MnCl2 (pH7.5 @25ºC))中加入1µg 500bp的dsRNA，以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的RNase III，然后用超纯水补至10µl，37ºC孵育20分钟进行反应。反应完成后立即加入终浓度为50mM的EDTA以终止反应。取反应后产物10μl加入2μl 6X DNA Loading Buffer ，1%的琼脂糖凝胶电泳，随后在紫外灯下观察实验结果。如图所示，本产品与N公司的RNase III产品相比，对500bp的dsRNA具有类似的酶切效果。dsRNA是使用T7 Quick High Yield RNA Transcription Kit 将两条含T7启动子的500bp的互补DNA链进行体外转录生成两条互补的500nt单链RNA，随后使用Annealing Buffer for RNA Oligos (5X) 并按照该产品说明书推荐的程序，把这两条互补的500nt单链RNA进行退火反应得到的产物。实际操作时不同实验条件获得的实验结果会略有差异，图中所示结果仅供参考。用途： dsRNA的水解酶切；产生siRNA；基因沉默；基因靶标确认 (target validation)。来源：纯化自携带编码大肠杆菌RNase III基因的E.coli重组菌株。酶储存溶液： 10mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 1mM DTT, 0.5mM EDTA, 50% Glycerol (pH8.0 @25ºC)。10X Reaction Buffer: 500mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 10mM DTT (pH7.5 @25ºC). 失活或抑制：不能进行热失活；加入反应终止液10X EDTA(终浓度为50mM EDTA)可使RNase III失活。注意事项： RNase III不能进行热失活，否则会降低siRNA的产率；可通过加入终浓度为50mM的EDTA以终止反应。RNA极易降解，在整个操作过程中应尽可能避免环境中RNase的影响。RNase III使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明： 1.siRNA的制备：a.对于siRNA的制备，参考下表在冰浴中配制如下反应体系(以20和100μl体系为例)：ReagentVolumeVolumeFinal ConcentrationdsRNAxμl (2μg)xμl (10μg)100ng/µl10X Reaction Buffer2μl10μl1X10X MnCl22μl10μl1XNuclease-Free Water(14-x)μl(70-x)μl-RNase III2μl10μl0.2U/µlTotal Volume20μl100μl注1：为获得最好的底物酶切效果，实验过程中可参考酶活单位定义对酶用量进行适当调整，摸索最优反应体系。注2：如果同时进行多个反应，可以把上表中除RNase III之外所有成分提前混合，分装到各反应管中，最后再加入RNase III。b.按上表设置好反应体系后，适当轻轻混匀反应体系，随后低速离心以使粘附在管壁上的液体沉淀至管底。c.反应条件：37ºC孵育20分钟。注：反应时间可以根据实际情况酌情适当调节。d.终止反应：加入反应终止液10X EDTA(终浓度为50mM EDTA)使RNase III失去活性。注：不能进行热失活，热失活会降低siRNA的产率。2.其它用途可以参考适当的文献资料进行。参考文献：1.Morlighem JE, Petit C, Tzertzinis G. Biotechniques. 2007. 42(5):599-600, 602, 604-6.2.Court DL, Gan J, Liang YH, Shaw GX, Tropea JE, et al. Annu Rev Genet. 2013. 47:405-31.3.Donzé O, Picard D. Nucleic Acids Res. 2002. 30(10):e46.
生物活性	One unit is the amount of enzyme required to digest 1µg of dsRNA to siRNA in 20 minutes at 37ºC in a total reaction volume of 50µl.
表达系统	E. coli
种属	宋内志贺菌(Shigella sonnei)
无载体	Yes
无动物源	Yes
Accession #	B1XB41.1

储存与运输

物理形态	液体
储存缓冲液	10mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 1mM DTT, 0.5mM EDTA, 50% Glycerol, pH 8.0
浓度	2.0 U/µL
储存温度	-20°C储存,避免反复冻融
运输条件	超低温冰袋运输
稳定性与储存	Store at -20°C long term (24 months). Upon delivery aliquot. Avoid freeze/thaw cycle.
单位定义	One unit is the amount of enzyme required to digest 1μg of dsRNA to siRNA in 20 minutes at 37ºC in a total reaction volume of 50μl.
分子类型	酶

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

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批号(Lot Number)	证书类型	货号
ZJ25F0622560	分析证书	R749972
ZJ25F0622561	分析证书	R749972
ZJ25F0622562	分析证书	R749972

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