Klenow Fragment, Exo-

COA

级别和纯度:

5 U/μL

表达系统: E. coli
Accession #: 2KFZ_A,P00582
生物活性: One unit is the amount of enzyme required to catalyze the incorporation of 10nmol of deoxyribonucleotides (dNTPs) into a polynucleotide within 30 minutes at 37℃.

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货号 (SKU)	包装规格	是否现货
K747451-200U	200U	现货
K747451-1KU	1KU	现货
K747451-5×1KU	5×1KU	现货

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Accession#: 2KFZ_A (2) Accession#: P00582 (2) Gene ID: 93778073 (2) Gene ID: 948356 (2)

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基本描述

产品名称

Klenow Fragment, Exo-

别名

克列诺片段，Exo- | DNA聚合酶I片段突变体

英文别名

DNA polymerase I Fragment Mutant

规格或纯度

无动物源, 无载体, 生物活性, ActiBioPure™, 无菌, EnzymoPure™, 5 U/μL

产品介绍

本公司生产的 Klenow Fragment, Exo-，即没有外切酶活性的 Klenow 片段，是大肠杆菌聚合酶 I (E.coli. DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment, Exo-保留了 DNA 聚合酶 I 的 5'→3'聚合酶活性，但缺少完整的 Klenow 酶的 5'→3' 和 3'→5'外切酶活性。

组分和说明

K747451	Component	200U	1KU	5*1KU	Storage
K747451A	Klenow Fragment, Exo- (5 U/µl)	40μl	200μl	5*200μl	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.
K747451B	Reaction Buffer(10X)	200μl	1ml	5*1ml	-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.

产品应用

5'突出末端的标记；随机引物法进行 DNA 标记；Sanger 双脱氧法进行 DNA 测序等。

产品优势

由于 Klenow Fragment, Exo-没有外切酶活性，其在末端补平时经常会在 3'末端额外加上 1 个或多个核苷酸，因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。

使用说明

1.随机引物法进行 DNA 标记：

a.参考如下表格设置反应体系：

Reagent	Volume
DNA 10µl	(100ng)
Reaction Buffer (10X)	5µl
125µM random decamer or hexamer primer	10µl
补充无核酸酶的去离子水	至 40µl
混匀后沸水浴孵育 5-10 分钟，立即置于冰浴冷却。进行后续步骤前离心沉淀液
3 dNTP Mixture (0.25mM each , without the labeled dNTP)	4µl
[α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol (3000Ci/mmol)	1.85MBq (50µCi)
Klenow Fragment, Exo-	1µl (5U)
补充无核酸酶的去离子水	至 50µl

b.按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。

c.对于 random decamer primer，37℃孵育 5 分钟；对于 random hexamer primer，37℃孵育 10 分钟。

d.加入 4µl 0.25mM dNTP，混匀后 37℃孵育 5 分钟。

e.加入 1µl 0.5M EDTA，pH8.0 终止反应。

f.取 1µl 上述液体用于检测标记的效率。

g.用 Sephadex G-50 或 Bio-Gel P-60 或其它适当试剂盒纯化标记好的探针。

2.双链 DNA 5'突出(5' overhang)末端的标记：

a.参考如下表格设置反应体系：

Reagent	Volume
Digested DNA	10~15µl (0.1~4µg)
Reaction Buffer (10X)	2µl
[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol)	0.74 MBq (20µCi)
或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)	2.96 MBq (80µCi)
3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled dNTP)	2µl
Klenow Fragment, Exo-	0.2µl (1U)
补充无核酸酶的去离子水	至 20µl

b.按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。

c.30℃孵育 15 分钟。

d.75℃孵育 10 分钟终止反应。

3.双链 DNA 5'突出末端的补平：

a.对于双链 DNA 5'突出(5' overhang)末端的补平，参考下表在冰浴中配制如下反应体系。

Reagent	Volume	Final Concentration
Nuclease-Free Water	(16.6-x)µl	-
dsDNA with 5’ Overhang	xµl	~0.5µM or 5-200ng/µl
Reaction Buffer (10X)	2µl	1X
dNTP Mix (2.5mM each)	0.4µl	50µM
Klenow Fragment, Exo- (5U/µl)	1µl	0.25U/µl
Total Volume	20µl	-

注 1：按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex 在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体；如果同时进行多个反应，可以把上表中除 dsDNA with 5’ overhang 之外的所有溶液和酶提前混合，分装到各反应管，最后再加入 dsDNA with 5’ overhang。

注2：dsDNA with 5’ Overhang如果是寡核苷酸，最终浓度可以约为0.5µM，如果是消化后的DNA质粒等最终浓度可以约为 5-200ng/µl。

b.37℃孵育 10 分钟。

c.75℃孵育 10 分钟以终止反应。

保存条件： -20℃保存，≤0℃运输

注意事项：

（1）酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

（2）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

（3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

生物活性

One unit is the amount of enzyme required to catalyze the incorporation of 10nmol of deoxyribonucleotides (dNTPs) into a polynucleotide within 30 minutes at 37℃.

表达系统

E. coli

种属

大肠杆菌(E.coli)

无载体

Yes

无动物源

Yes

Accession #

2KFZ_A,P00582

来源

重组表达

预测分子量

68 kDa (monomer)

SDS-PAGE

68 kDa (monomer)

储存与运输

物理形态	液体
储存缓冲液	25mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) Glycerol, pH 7.5
浓度	5 U/μL
储存温度	-20°C储存,避免反复冻融
运输条件	超低温冰袋运输
稳定性与储存	长期储存-20℃（24个月）；避免反复冻融。
单位定义	37℃30分钟内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
分子类型	酶

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):

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批号(Lot Number)	证书类型	货号
ZJ25F0825981	分析证书	K747451
ZJ25F0825980	分析证书	K747451

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