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免疫荧光常见问题分析

发布于 2024年10月24日 更新时间 2024年10月24日
问题 原因 建议

背景过高

 一抗质量不高 使用特异性高、效价高的一抗

背景过高

一抗/二抗浓度太高 降低一抗/二抗浓度

背景过高

封闭不完全  增加蛋白封闭时间

背景过高

洗涤不充分 增加冲洗次数与时间

背景过高

可通过调节荧光显微镜的参数来减低背景

信号弱或无信号

 无目的蛋白或表达量极少 选用表达量高的细胞或组织

信号弱或无信号

 细胞通透性差 增加通透剂的作用时间或浓度

信号弱或无信号

一抗/二抗浓度太低 增大其浓度

信号弱或无信号

二抗选择错误（种属不匹配） 选用与一抗种属相匹配的二抗

荧光猝灭快

 荧光素本身特性决定，光稳定性差 选用光稳定性好的荧光素二抗

荧光猝灭快

用普通的封片剂封片 选用防荧光猝灭剂封片

细胞有自发荧光

 使用了戊二醛固定 在固定后荧光染色前进行荧光淬灭，如使用NaIO4，NaBH4，甘氨酸等，染色前检查自发荧光

细胞有自发荧光

材料本身（如石蜡）有自发荧光 设立阴性对照，通过降低荧光显微镜的参数来消除背景染色

细胞有自发荧光

细胞成分中能够产生自发荧光的分子（例如核黄素、细胞色素等）的含量高；培养细胞中死细胞／活细胞比例高

      

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