Anti-Flag 纳米抗体磁珠

COA

级别和纯度:

BioReagent

Magnetic Bead Content: ≥10 mg/mL; Bead Diameter: 2 μm

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货号 (SKU)	包装规格	是否现货
F1373479-0.1ml	0.1ml	现货
F1373479-0.5ml	0.5ml	现货
F1373479-1ml	1ml	现货
F1373479-5ml	5ml	期货

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基本描述

别名

DYKDDDDK纳米抗体磁珠 | Anti-Flag 磁珠

英文别名

DYKDDDDK tag Nanobody Magnetic Beads | Flag Magnetic Beads | Flag Nanobody Magnetic Beads | Anti-Flag Magnetic Beads

规格或纯度

BioReagent, Magnetic Bead Content: ≥10 mg/mL; Bead Diameter: 2 μm

稳定性与储存

Store at 2-8℃ long term (12 months). Do not freeze.

英文名称

Anti-Flag Nanobody Magnetic Beads

储存温度

2-8°C储存,禁止冷冻

运输条件

冰袋运输

产品介绍

储存缓冲液：20 mM PBS, 5% BSA

Flag纳米抗体磁珠偶联了经过严格筛选、优化并重组表达的Flag纳米抗体，可用于捕获哺乳动物、植物、细菌、酵母、昆虫等多种生物细胞、组织提取物中的Flag标签（DYKDDDDK）融合蛋白及其相互作用蛋白。
实验前先将Flag标签与目标蛋白在细胞或组织中融合表达；之后将Flag纳米抗体磁珠加入样本裂解液中，Flag纳米抗体与目标融合蛋白及其结合蛋白形成复合体；去除未结合的蛋白后，可以采用多种方法洗脱蛋白质，并且IP洗脱液中不会有抗体轻、重链污染。
产品特性：

磁珠直径	2 µm
蛋白结合量	≥1.5 mg 蛋白/mL磁珠
反应性	可特异性结合1×或3×Flag标签（DYKDDDDK），对融合蛋白N端、C端或中间的Flag标签均可以识别
应用	免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）、染色质免疫沉淀（CHIP）、RNA 结合蛋白免疫沉淀（RIP）
储存缓冲液	20 mM PBS, 5% BSA
储存条件	4℃. Do not freeze. 有效期1年

产品优势：
1、纳米抗体，无轻重链污染。IP复合物无论采用非变性洗脱还是变性洗脱均不会出现抗体的轻、重链污染问题。
2、亲和力强。低nM级别亲和力，轻松应对低拷贝基因，或难转染细胞系。
3、结合量高。采用定向偶联技术每10 μL抗体磁珠可结合约15 μg重组蛋白。
4、特异性强。抗体磁珠通过了10株以上的空白细胞系检测不易产生非特异吸附。
5、兼容性好。无论标签在诱饵蛋白的N端或C端都可识别。
6、稳定性好。通过了40℃高温测试轻松应对物流失温，实验后忘记放冰箱等情况。
使用说明：
一、所需主要仪器
磁力架、混匀仪、低温离心机、超声破碎仪。
二、建议的缓冲液配方

缓冲液	配方
裂解缓冲液	10 mM Tris-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.5 % NP-40（在4°C下调整pH）
漂洗缓冲液	10 mM Tris-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.05 % NP-40（在4°C下调整pH）
洗脱缓冲液	3×Flag多肽用PBS溶解成400 ng/µL
2×SDS-PAGE上样缓冲液	125 mM Tris-HCl pH 6.8, 4% SDS, 20%甘油, 0.004%溴酚蓝

三、注意事项
1、请勿干燥、冷冻或剧烈涡旋磁珠，禁止长时间置于磁场，可能会引起磁珠聚团，降低结合活性。
2、为保证磁珠均匀分布，请通过反复颠倒、轻微涡旋彻底混匀瓶中磁珠。
3、请勿使用PBS漂洗磁珠，否则会导致磁珠无法被磁力架吸附。
4、实验前应在裂解缓冲液和漂洗缓冲液中加入足量的蛋白酶抑制剂，RIP实验还应添加足量的RNase抑制剂，混合均匀，冰上保存，现配现用。
5、IP实验前，应先确认样本裂解液（input）中诱饵蛋白的表达水平。
6、IP实验应设置阴性对照组，通常采用表达Flag标签空载体的样本作为对照。
7、如果使用建议的缓冲体系不能获得很好的实验结果，可自行筛选、配制缓冲液进行实验。
8、具体样品量和孵育时间依赖于每个特定体系，可能需要优化才能得到最大产量。
9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
10、本产品仅限于科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗。
四、操作步骤
1、样本裂解（参考）
(1) 按如下方法收集样本：

样本类型	样本量/组	收集方法
动物细胞	1×10⁷个	冷PBS漂洗2~3次，每次4℃ 500g 离心5min收集沉淀，尽量吸干液体
动物组织	100~200 mg	冷PBS或生理盐水清洗干净，彻底去除血液等成分，液氮充分研磨
植物组织	200~300 mg	无菌双蒸水清洗干净，液氮充分研磨
革兰氏阴性细菌	50μL 菌体沉淀	冷PBS漂洗2~3次，每次4℃ 5000 g离心5 min收集沉淀，尽量吸干液体

(2) 将样本置于冰上，每组样本加入500 μL预冷的裂解缓冲液，吹打混匀。
(3)
a. 动物细胞：最好冰上超声至溶液基本澄清；如果无超声条件，可以置于冰上裂解30min，间隔手动混匀。
b. 动物组织、植物组织、微生物：冰上超声破碎至溶液基本澄清。
(4) 4℃ 12000 g 离心 15 min，收集上清至新的离心管中，取30 μL作为input，剩余置于冰上备用或 -80℃保存。
【注意】：
i. 当样本不能完全裂解时（溶液很浑浊），可以增加裂解缓冲液、改善裂解方法或改善超声条件继续裂解，超声条件因样本类型和超声设备而异，应提前摸索好合适的条件。
ii. 裂解缓冲液用量可随样本量增加而等比例增加，但总孵育体积最大不超过离心管体积的2/3，体积过大可以更换大规格离心管。
2、免疫共沉淀
(1) 将Flag纳米抗体磁珠上下颠倒混匀，每组取20~30 μL磁珠到新的离心管中。
(2) 加入200 µL漂洗缓冲液，颠倒混匀30次，放磁力架上静置1 min并弃上清。
(3) 重复上步操作一次。
(4) 向磁珠中加入相应组别的样本裂解液，放混匀仪上室温孵育1~2 h或4℃孵育过夜。
(5) 放磁力架上静置1 min并弃上清。
(6) 加入500 μL漂洗缓冲液，颠倒混匀30次，放磁力架上静置1 min并弃上清。
(7) 重复上步操作两次，共漂洗三次。
3、洗脱
(1) SDS-PAGE 上样缓冲液洗脱（变性洗脱法）：加入50 μL 1×SDS-PAGE上样缓冲液，95℃加热5~10min。放磁力架上静置1min或5000 g离心1min，收集上清至新的离心管中。洗脱后的蛋白 -20℃保存，或直接用于SDS-PAGE和Western Blot实验，SDS-PAGE胶条可以用于质谱检测。
(2) 3×Flag肽竞争洗脱（非变性洗脱法）：加入40~50 µL Flag 多肽洗脱液 (400 ng/µL)，涡旋震荡 20s，放混匀仪上室温洗脱10~15min，涡旋震荡20s；1000 g离心20s，放磁力架上静置1min，收集上清至新的离心管中。洗脱后的蛋白 -80℃保存，或直接用于SDS-PAGE、Western Blot和质谱等实验。
【备注： Anti-Flag 纳米抗体磁珠没有抗体轻重链污染问题，建议首选变性洗脱法，洗脱效率更高。】

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

C of A & Other Certificates(BSE/TSE, COO):

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批号(Lot Number)	证书类型	货号
ZJ25F0724605	分析证书	F1373479
ZJ25F0724604	分析证书	F1373479
ZJ25F0724603	分析证书	F1373479

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质量（小瓶）

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