| 货号 (SKU) | 包装规格 | 是否现货 | 价格 | 数量 |
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| E1372025-20T |
20T |
现货  |
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| E1372025-100T |
100T |
期货 |
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| 规格或纯度 | BioReagent, 分子生物学级, 无菌 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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| 稳定性与储存 | Store at -20℃ long term (12 months). Avoid freeze/thaw cycle. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 英文名称 | EZ-TA/Blunt Zero pTOPO II Cloning Kit | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 储存温度 | -20°C储存,避免反复冻融 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 运输条件 | 超低温冰袋运输 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 产品介绍 |
本产品采用拓扑异构酶 I（Topoisomerase I）的连接原理，不同于使用 T4 DNA 连接酶的传统克隆方法，可在数分钟甚至数秒内高效连接 DNA 片段，可兼容 TA 克隆与平末端克隆。有效连接片段长度可达 10 kb。此外，本产品无自连、零背景，无需蓝白斑筛选，阳性克隆比例高，极少出现空载体，是简单、快速、零背景免筛选的 TOPO 通用型克隆试剂盒。载体上具有氨苄青霉素（Amp）和卡那青霉素（Kan）双抗性，有助于减少卫星菌落，便于后续挑取阳性克隆。试剂盒中提供 800 bp 的 DNA 片段（Control Insert）作为连接反应的阳性对照，同时提供 M13 F/R Primer Mix 通用型引物用于菌落 PCR 鉴定。 产品组分表
产品特点 1. 兼容范围：适用于连接平末端和带3’-A的PCR产物。 2. 快速反应：连接反应仅需5 min。 3. 阳性率高：载体具有氨苄青霉素和卡那青霉素双抗性。 4. 简单高效：无自连、零背景，无需蓝白斑筛选。 保存条件 -20℃恒温保存，保质期 12 个月。 操作步骤 1. 连接反应的准备：PCR反应需使用非磷酸化引物。扩增产物可为平末端或携带3’-末端A碱基。 注1：PCR产物，特别是以质粒为模板的PCR产物，推荐进行胶回收纯化后使用，因为模板质粒也可能长出菌落（非目的载体）。 注2：酶切产物或其它带磷酸化末端的片段，需要进行去磷酸化处理后再进行连接反应。 2. 连接反应： 1） 室温下，按下表配制反应体系。 注：此步骤在室温进行，不能在冰上进行。
用移液器轻轻吹打或轻弹管底混匀，低速瞬时离心至所有液体在离心管底。 a如果使用5 μl体系连接，各成分按照比例减半使用。为提高加样准确性，尽量使用正常体系操作。 不同大小插入片段的推荐用量：
2） 20-37℃连接5 min。 注：本载体推荐20-37℃放置5 min完成连接，但多数情况下连接2-3 min已经可以得到足够多的转化子。 3） 连接产物可直接转化感受态细胞。如尚未准备好感受态细胞，可以将连接产物短时间置于冰上备用。 3. 转化：以常规化学转化为例，具体方法请参考所使用感受态细胞的说明书；电转化需首先对连接反应液进行脱盐处理。 1） 将感受态细胞置于冰上融解。 2） 取适量连接反应液加入至感受态细胞中（连接反应液体积≤10%感受态细胞体积），轻柔混匀，冰浴10-30 min。 3） 42℃加热45-60 s后，冰浴2 min，该过程不要摇动离心管。 4） 加入800 μl SOC或LB培养基，37℃振荡培养40-60 min。 5） 将菌液均匀涂布到含100 μg/ml氨苄青霉素（Amp）或者50 μg/ml卡那青霉素（Kan）的LB琼脂平板，37℃培养 12-16 h。 4. 转化子筛选鉴定： 1） 菌落/菌液PCR：可选用M13 F/R Primer Mix或基因特异性引物进行菌落/菌液PCR扩增。应尽可能设立阳性对照和阴性对照反应。 2） 酶切鉴定：挑取白色正常菌落，摇菌抽提质粒。插入片段较大的情况下，可直接电泳观察质粒大小即可鉴定出是否含有插入片段；也可用EcoR I/EcoR V单酶切释放插入片段或用其它合适的内切酶酶切，琼脂糖凝胶电泳检测片段大小，确定是否含有目的片段。 3） DNA测序：选用M13 Forward和M13 Reverse通用型引物进行测序鉴定。 物理外观：Liquid 是否无菌：是 |
| 分子类型 | 试剂盒 |
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| 批号(Lot Number) | 证书类型 | 货号 |
|---|---|---|
 ZJ25F0724834 |
分析证书 | E1372025 |
¥3,597.90
¥819.90
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400-620-6333
