分散酶II

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代谢物 (8911) 蛋白酶 (14)

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基本描述

产品名称	分散酶II
别名	蛋白酶来源于多粘芽孢杆菌
英文别名	Protease from Bacillus polymyxa
规格或纯度	EnzymoPure™, ≥0.5units/mg
生化机理	分散酶II是一种中性的蛋白酶，可水解非极性氨基酸残基的N-末端肽键。它可用于分离生长在体外的多种组织和细胞。该酶非常温和，不会对细胞膜造成损伤。它还可用于防止悬浮培养物中的细胞结块。该蛋白酶可水解纤连蛋白和IV型胶原蛋白，但不能水解层粘连蛋白、V型胶原蛋白、血清白蛋白或转铁蛋白。中性蛋白酶®II具有切割亮氨酸-苯丙氨酸键的特异性。Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+、Fe3+和Al3+ 可灭活分散酶I。EDTA、EGTA、Hg2+ 和其他重金属可抑制该酶活性。每g-mol纯化分散酶I含有1g锌原子。如果通过EDTA或EGTA等螯合剂除去锌成分，则产生无活性的酶蛋白。该酶不受血清抑制。
产品介绍	Dispase II，中文名分散酶 II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II 还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶（如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，该酶具有以下优势：1）一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性； 2）来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染； 3）稳定性强，不受温度、pH 及血清组分的影响； 4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。本品非无菌 Dispase II，来源于 Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4U/mL 最佳 pH：6.0-8.5 使用说明： 1 母液及工作液配制 1）用 50 mM HEPES-KOH 缓冲液(pH 7.4, 150 mM NaCl)（60165ES）溶解适量本品冻干粉，配制成10 mg/mL 的储存液，用0.22 µM 滤膜过滤除菌。 2）使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。【注】不推荐使用高于 2.4 U/mL 的工作浓度。 2 组织的解离 1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块； 2）用无菌 PBS 清洗组织块； 3）向上述组织块中加入 Dispase II 溶液（工作浓度为 0.6-2.4 U/mL），并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。 4）37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。【注】若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1h 即可达到分离目的，但更长时间（如数小时）的孵育也不会明显影响细胞活性。 5）如有需要，可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，若是需要，换用新鲜 dispase 溶液以进一步解离残留组织。 6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液； 7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。 3 细胞传代 1）利用 Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于 37℃孵育 5 min； 2）吸除上述溶液，继续于 37℃孵育 10 min； 3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育 15 min； 4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞； 5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。 The enzyme from Beyotime has been used in developing a protocol for ex vivo culture of mouse embryonic mammary buds. It has been used in the treatment of rat heart pieces during the isolation of mitochondria from rat heart.

储存与运输

物理形态	固体
浓度	≥0.5units/mg
储存温度	2-8°C储存
运输条件	冰袋运输
稳定性与储存	4°C保存。
CAS编号和信息	42613-33-2
单位定义	在温度 37℃、pH 值为 7.5 的条件下，每分钟水解酪蛋白释放出相当于1 µM(181µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为一个蛋白酶活性单位，以U 表示。

质检证书（CoA,COO,BSE/TSE 和分析图谱)

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批号(Lot Number)	证书类型	货号
H2529329	分析证书	D743370
H2529330	分析证书	D743370
L2417409	分析证书	D743370
F2526015	分析证书	D743370
L2417408	分析证书	D743370

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